使用點(diǎn)成LUNA-FX7™自動(dòng)細(xì)胞計(jì)數(shù)儀進(jìn)行體細(xì)胞計(jì)數(shù)

1 簡(jiǎn)介

體細(xì)胞計(jì)數(shù)（SCC）是乳品行業(yè)用于管理乳房健康的一個(gè)成熟參數(shù)。體細(xì)胞計(jì)數(shù)的增加表明存在乳房?jī)?nèi)感染（IMI），進(jìn)而引發(fā)乳腺炎。這種情況可能導(dǎo)致受孕率低下并影響牛奶產(chǎn)量。因此奶牛場(chǎng)會(huì)使用基于流式細(xì)胞術(shù)的細(xì)胞計(jì)數(shù)儀，如 FossoMatic。盡管這種方法對(duì)于高通量分析很有效，但在研究領(lǐng)域中仍需要一種成本較低的方法來(lái)計(jì)數(shù)小樣本量的細(xì)胞。

由于牛奶中存在脂肪和蛋白質(zhì)碎片，對(duì)牛奶中的體細(xì)胞計(jì)數(shù)頗具挑戰(zhàn)性。為了解決這個(gè)問(wèn)題，已開(kāi)發(fā)出體細(xì)胞染色液，以便與點(diǎn)成 LUNA-FX7™ 配合，進(jìn)行簡(jiǎn)單直接的體細(xì)胞計(jì)數(shù)。在本文中，我們展示了點(diǎn)成 LUNA-FX7™ 自動(dòng)細(xì)胞計(jì)數(shù)儀使用體細(xì)胞染色液高效計(jì)數(shù)牛奶中體細(xì)胞的能力。

2 材料與方法

從 POSTBIO 公司獲取了高、中、低濃度的生鮮牛奶樣本。只有低濃度樣本的體細(xì)胞計(jì)數(shù)低于每毫升 2×10?個(gè)細(xì)胞。將每個(gè)牛奶樣本與體細(xì)胞染色液（產(chǎn)品編號(hào) F23101）按 1:4 的比例混合。使用點(diǎn)成 LUNA-FX7™ 搭配單通道載玻片（產(chǎn)品編號(hào) L72011）進(jìn)行細(xì)胞計(jì)數(shù)。在熒光細(xì)胞計(jì)數(shù)模式下采用了經(jīng)過(guò)修改的參數(shù)配置（表 1）。

3 染色原理

由于牛奶中的脂肪和蛋白質(zhì)碎片，在明場(chǎng)（BF）通道中進(jìn)行體細(xì)胞計(jì)數(shù)效果不佳（圖 1A），因?yàn)榕Ｄ讨械倪@些碎片在點(diǎn)成 LUNA-FX7™ 可檢測(cè)的波長(zhǎng)下幾乎沒(méi)有熒光信號(hào)，所以使用含有碘化丙啶（PI）的體細(xì)胞染色液來(lái)進(jìn)行體細(xì)胞計(jì)數(shù)。該染色液還含有一種去污劑，可誘導(dǎo)細(xì)胞裂解，碘化丙啶無(wú)法穿透完整的細(xì)胞。一旦細(xì)胞被通透，碘化丙啶就會(huì)通過(guò)插入堿基對(duì)之間與 DNA 結(jié)合，結(jié)合后其熒光強(qiáng)度會(huì)增加 20 至 30 倍。這使得能夠準(zhǔn)確區(qū)分牛奶中的體細(xì)胞和碎片。因此在進(jìn)行體細(xì)胞計(jì)數(shù)時(shí)不會(huì)受到牛奶中碎片的干擾。

4 結(jié)果

對(duì)點(diǎn)成 LUNA-FX7™ 的結(jié)果進(jìn)行了仔細(xì)分析和檢查，以確認(rèn)碘化丙啶標(biāo)記和識(shí)別的體細(xì)胞是否準(zhǔn)確。從標(biāo)記圖像中可以看出，點(diǎn)成LUNA-FX7™ 成功區(qū)分了牛奶中的體細(xì)胞和碎片（圖 1A）。此外，將點(diǎn)成 LUNA-FX7™ 的體細(xì)胞計(jì)數(shù)結(jié)果與基于流式細(xì)胞術(shù)的細(xì)胞計(jì)數(shù)儀的已知濃度進(jìn)行了比較。結(jié)果顯示，兩種不同平臺(tái)的結(jié)果之間具有很強(qiáng)的相關(guān)性（低濃度樣本低于每毫升 2×10?個(gè)細(xì)胞）（圖 1B）。

表 1.點(diǎn)成 LUNA-FX7™ 熒光細(xì)胞計(jì)數(shù)模式下體細(xì)胞計(jì)數(shù)的優(yōu)化參數(shù)設(shè)置

圖 1. （A）該圖像顯示了使用點(diǎn)成 LUNA-FX7™ 成功染色并標(biāo)記的牛奶樣本中的體細(xì)胞。

（B）柱狀圖顯示了點(diǎn)成 LUNA-FX7™ 和基于流式細(xì)胞術(shù)的細(xì)胞計(jì)數(shù)儀所獲得的體細(xì)胞計(jì)數(shù)數(shù)據(jù)之間具有很強(qiáng)的相關(guān)性。

5 結(jié)論

本文證明了點(diǎn)成 LUNA-FX7™ 自動(dòng)細(xì)胞計(jì)數(shù)儀能夠使用體細(xì)胞染色液有效地對(duì)體細(xì)胞進(jìn)行計(jì)數(shù)。同時(shí)點(diǎn)成LUNA-FX7™ 和基于流式細(xì)胞術(shù)的細(xì)胞計(jì)數(shù)儀的體細(xì)胞計(jì)數(shù)結(jié)果比較顯示，二者之間具有很強(qiáng)的相關(guān)性。因此，點(diǎn)成LUNA-FX7™ 自動(dòng)細(xì)胞計(jì)數(shù)儀功能多樣，可用于包括體細(xì)胞計(jì)數(shù)在內(nèi)的多種應(yīng)用。